Charakterisierung des viralen TAP-Inhibitors ICP47 und Entwicklung nicht-radioaktiver Untersuchungsmethoden

Inhaltsangabe: Zusammenfassung: Die vorliegende Arbeit befa t sich mit dem Antigenpeptid-Transporter TAP, dem eine Schl?sselrolle in der Immunerkennung infizierter oder entarteter Zellen zukommt. So werden Proteinbruchst?cke, die mit Hilfe des Proteasomenkomplexes im Zytosol erzeugt werden von TAP in das endoplasmatische Retikulum gepumpt, wo sie mit MHC-Klasse-I Molek?len assemblieren. Nachdem Transport dieses Komplexes auf die Zelloberfl?che tasten zytotoxische T-Lymphocyten die pr?sentierten Peptide ab und eliminieren Zellen, die Fragmente von zellfremden Proteinen tragen. Im ersten Teil dieser Studie werden neue, nicht-radioaktive M?glichkeiten zur Untersuchung der Peptid-TAP-Wechselwirkung entwickelt. So werden elektronenmikroskopische Analysen mit Goldk?rnchen-tragenden Peptiden besprochen und die Nutzung des S-Peptids der Ribonuklease-S oder Luciferin-markierter Peptide diskutiert. Besonders wird auf das Potential von Peptiden eingegangen, die mit Fluoreszenzsonden gekoppelt wurden. So zeigte sich, da Fluorescein-markierte Peptide sowohl f?r die Quantifizierung der Peptidbindung und des Peptidtransports als auch zur Untersuchung der r?umlichen Struktur der Peptidbindungstasche hervorragend geeignet sind. Im zweiten Teil wird das Herpes-Simplex-Virus Protein ICP47 charakterisiert, das durch die Inhibierung von TAP die Immunerkennung des Virus und somit die Lyse der infizierten Zelle verhindert. Die Wechselwirkung dieses klinisch hoch-relevanten Immunmodulators mit seinem Zielprotein TAP wird ausf?hrlich kinetisch und thermodynamisch analysiert. Dabei wird auf die Speziesspezifit?t verschiedener Herpes-Simplex-Virus St?mme eingegangen. Dar?ber hinaus werden strukturelle Besonderheiten, die durch eine Membran-ICP47-Wechselwirkung erzeugt werden, theoretisch und CD-spektroskopisch untersucht. Schlie lich wird mit Hilfe von Sequenz-vergleichenden Studien und durch Experimente mit systematisch verk?rzten ICP47-Varianten die aktive Dom?ne des viralen Inhibitors

Author: Lars Neumann

Publisher: Diplom.de

Publication Date: Jun 07, 1998

Number of Pages: 96 pages

Binding: Paperback or Softback

ISBN-10: 383860881X

ISBN-13: 9783838608815